Локализация и клонирование последовательностей кДНК генов открывают принципиально новые возможности диагностики наследственных заболеваний, основанные на исследовании мутантных аллелей у пациентов, членов их семей или у предполагаемых гетерозиготных носителей патологических мутаций. Это в равной мере относится и к пре-натальной диагностике, которая может быть проведена с использованием молекулярных методов анализа на самых ранних стадиях развития плода. Эти же подходы вполне приемлемы для диагностики до появления каких-либо клинических или биохимических симптомов болезни (досимптоматическая диагностика), что позволяет выработать и начать рациональную тактику лечения (упреждающая терапия), а также эффективно выявлять гетерозиготных носителей в семьях высокого риска, что является важным фактором профилактики наследственных болезней. Решающими преимуществами молекулярной диагностики являются ее универсальность, возможность использовать для анализа любые ДНК-содержащие клетки или ткани, причем анализ может быть произведен на любых стадиях онтогенеза, начиная со стадии зиготы.
Принципиально различают прямую и непрямую ДНК-диагностику моногенных наследственных болезней. В общем случае использование прямых методов диагностики возможно лишь для клонированных генов с известной нуклеотидной последовательностью полноразмерной кДНК, при этом необходимо предварительное генотипирование мутантных аллелей у родителей. В случае прямой диагностики объектом молекулярного анализа является сам ген, точнее мутации этого гена, идентификация которых и составляет основную задачу исследования. Такой подход особенно эффективен при наличии точной информации о природе, частоте и локализации наиболее распространенных (доминирующих по частоте) мутаций соответствующих генов, а также о наличии в них особенно легко мутирующих «горячих» точек. К таковым относятся мутация delF508 и ряд других мутаций при муковисцидозе, делеционные мутации при миодистрофии Дюшенна, мутация R408W при фенилкето-нурии, инверсионная мутация при гемофилии А, протяженная делеция при адреногенитальном синдроме, экспансии триплетных повторов в случае «динамических» мутаций при синдроме ломкой Х-хромосомы и при ряде других нейродегенеративных заболеваний. Методы, используемые для направленного поиска этих мутаций, подробно рассмотрены в главе 4. В ряде случаев (муковисцидоз, фенилке-тонурия, серповидно-клеточная анемия) эти методы удалось автоматизировать, что позволяет одновременно тестировать сразу несколько (до 30 и более) различных мутаций. При этом появляется реальная возможность выявлять свыше 95 - 98% мутантных хромосом, что делает целесообразным и экономически оправданным скринирование всей популяции отдельных стран на выявление мутантных особей для последующей организации эффективных профилактических мероприятий, направленных на предупреждение рождения больных детей. Подобные программы по муковисцидозу уже успешно проводятся в ряде стран Западной Европы (в Великобритании, Дании, Франции) и Северной Америки.
суббота
ПРЯМЫЕ И КОСВЕННЫЕ МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
