Использование экспрессионных библиотек для изоляции кодирующих последовательностей гена рассматривалось ранее. После секвенирования кДНК можно, исходя из генетического кода, прогнозировать аминокислотный состав белка и произвести компьютерный поиск в банке данных гомологичных последовательностей в составе белков с уже известной структурой и функциями. Выявление родственных белков, близких по своему полипептидному составу, значительно ускоряет и облегчает дальнейший молекулярный анализ функционирования исследуемого белка в клетке. Аминокислотная последовательность белка позволяет прогнозировать его третичную структуру, идентифицировать домены, оценивать функциональную значимость целого белка и отдельных его компонентов. Не менее важным практическим следствием этих данных является также возможность получения антител к строго специфичным участкам белка. Для этого могут быть использованы два подхода - биохимический и молекулярно-генетический. В первом случае для иммунизации используют искусственно синтезированные полипептиды, которые пришивают к белковой молекуле-носителю (гаптену). Размеры таких полипептидов обычно не превышают 30 аминокислот - они не могут быть очень большими из-за высокой стоимости и трудоемкости синтеза длинных молекул. При втором подходе экзон-ные участки гена инсертируют в экспрессионный вектор в область, кодирующую селектируемый белок. В результате экспрессии такой конструкции получают слитый белок, в котором наряду с аминокислотной последовательностью селектируемого маркера содержится определенный фрагмент исследуемого белка. Эту химерную молекулу и используют для иммунизации животных и получения моновалентных или моноклональных антител. При наличии антител могут быть применены различные иммунологические подходы для анализа тканеспе-цифического и внутриклеточного распределения белка, исследования его модификаций, а также для получения нативного белка в препаративных количествах.
