Прогресс в области генетического картирования

Дальнейший прогресс в области генетического картирования в зна­чительной степени ассоциируется с деятельностью многих научно-исследовательских центров и лабораторий по созданию банков клеточных культур, представляющих наиболее интересные и обширные родословные. Так, в Центре по изучению полиморфизма человека (СЕРН) (Париж, Франция) была создана уникальная коллекция перевиваемых клеточных культур от всех членов семей, многоступенчатые родословные которых насчитывают многие десятки и даже сотни индивидуумов (СЕРН-семьи) [Todd J.A., 1992; Weissenbach J. et al., 1992]. Перевиваемые линии клеток получали из первичных культур, трансформированных вирусом Эпштейна-Барр, после чего такие лимфобластозные клетки становятся «бессмертными», т. е. могут неограниченно долго поддерживаться в условиях культивирования. СЕРН-семьи представляют собой идеальные системы для генетического анализа наследственных признаков. В результате исследования этих клеточных линий определены генотипы членов СЕРН-семей одновременно по тысячам полиморфных ло-кусов и построены соответствующие генетические карты.
Кроме того, совместными усилиями многих лабораторий мира были созданы банки клеточных культур, в которых поддерживаются коллекции лимфобластозных линий клеток, полученных от членов наиболее информативных семей, в которых наблюдается сегрегация по различным наследственным признакам, в том числе по моногенным заболеваниям. Материал этих линий в виде клеточных клонов или образцов ДНК используется, в частности, для анализа сцепления сегрегирующих генов с известными генетическими маркерами или с вновь описанными поли­морфными локусами. Таким образом, во многих случаях при картирова­нии генов человека удается преодолеть ограничения, связанные с недос­татком обширных информативных родословных.
Наконец, в начале 70-х годов появилась реальная возможность точной идентификации не только всех хромосом в кариотипе человека, но и их отдельных сегментов. Это связано с появлением методов дифферен­циального окрашивания препаратов метафазных хромосом, которые, по сути, произвели революцию в цитогенетике и хромосомологии. Для по­лучения дифференциальной окраски хромосомные препараты окраши­вают некоторыми флюорохромами, либо после соответствующей проте-олитической обработки или нагревания - красителем Гимза. При этом на хромосомах выявляется характерная поперечная исчерченность, так называемые диски (бэнды), расположение которых специфично для ка­ждой хромосомы. На метафазных хромосомах малой степени спирали-зации идентифицируется около 750 таких полос, на прометафазных хромосомах - 2500-3000. Следовательно, величина небольших дисков на прометафазных хромосомах соответствует примерно 1 сМ на цитоге-нетических картах или 1 млн п.о. на физических картах. Такие ориенти­ровочные расчеты, как уже упоминалось, оказываются полезными при сопоставлении масштабов различных генетических карт.