суббота

Класс простых по­второв

(C-A)n(G-T)n представляют собой наиболее частый класс простых по­второв, обнаруженных в геноме человека (за исключением АпТп-мультимеров). Такие повторы присутствуют примерно в 1 % колоний из геномных библиотек, сконструированных на базе фрагментов длиной 300-500 п.о., которые образуются после переваривания геномной ДНК эндо-нуклеазой Alul. Более 90% из них оказываются полиморфными по числу копий в кластере, причем в 70% локусов присутствует более трех аллелей. В 1992 г. группе французских ученых под руководством Жана Вайссенба-ха удалось разработать систему идентификации с помощью ПЦР индиви­дуальной изменчивости в местах локализации (С-А)п-повторов и на этой основе создать геномную карту из 814 высокополиморфных индексных маркеров со средним расстоянием между ними около 5 сМ, получившую название Genethon-коллекции микросателлитных маркеров [Weissenbach J. et al, 1992]. Для этого были просеквенированы более 12 000 фрагментов ДНК, выделенных из геномной Alul-библиотеки путем ее скрининга poly(dC-dA)poly(dG-dT) ДНК-зондом. Праймеры для амплификации под­бирали из последовательностей ДНК, окружающих повторы, используя для этого компьютерные программы. Для дальнейшего анализа было ото­брано около 3000 (С-А)п-сайтов и проведена специфическая амплифика­ция этих участков у четырех неродственных СЕРН-индивидуумов. На сле­дующем этапе была определена хромосомная принадлежность полутора тысяч наиболее информативных маркеров путем их идентификации в па­нели из 18 соматических гибридных клонов, содержащих разные наборы хромосом человека. Детальная карта сцепления индексных маркеров по­строена по результатам их генотипирования в коллекции 8 самых больших СЕРН-родословных. Предложенная система маркеров перекрывает все хромосомы, а суммарное расстояние между ними соответствует примерно 90% всего генома человека.