вторник

Гибридизация in situ

Гибридизация in situ является одним из наиболее эффективных мето­дов картирования комплементарных ДНК-зонду последовательностей ДНК на хромосомах. Эта методика особенно эффективна при исследо­вании распределения по геному повторяющихся последовательностей ДНК, клонированных последовательностей ДНК анонимного происхож­дения, при определении не только хромосомной принадлежности, но и внутрихромосомнои локализации уникальных генов в тех случаях, когда имеются соответствующие ДНК-зонды. При этом разрешающая способ­ность метода может достигать нескольких хромосомных бэндов. Со­гласно последним данным, в экспериментах на специально приготов­ленных и растянутых интерфазных хромосомах человека разрешающая способность метода FISH может достигать 50 тыс. п.о., что составляет всего около V2o величины среднего хромосомного бэнда. Проблемы взаиморасположения клонированных фрагментов ДНК даже в пределах одного хромосомного локуса также с успехом решаются методом FISH.

Гибридизация in situ между молекулами РНК и кДНК-зондами про­водится на гистологических препаратах и является одним из наиболее эффективных методов анализа тканеспецифического распределения и •внутриклеточной локализации мРНК [Манк М, 1990]. Подробно с этим и другими современными методами молекулярного и цитогенетического анализа, а также с их многочисленными модификациями и вариантами можно ознакомиться в серии работ, руководств и обзоров [Маниатис Т. и др., 1984; Дейвис К., 1990; Sambrook J. et al., 1989].