вторник

Клонирова­ние в космидах

В последнее время большое распространение получило клонирова­ние в космидах — конструкциях, объединяющих в себе преимущества плазмид и фагов. Космиды получены на основе плазмид, но в них вве­дены генетические элементы фага X, отвечающие за упаковку ДНК в фаговой частице. Такие векторы могут существовать не только в виде плазмид, но и в виде фаговых частиц in vitro. Космиды обладают ббльшей клонирующей способностью по сравнению с плазмидными и фаговыми векторами и могут нести до 40-45 тыс. п.о. инсертированной ДНК. Все вышеперечисленные векторы используют для клонирования в прокариотических системах.

Векторы, пригодные для направленного переноса в эукариотиче-ские клетки, конструируют на основе прокариотических или дрож­жевых плазмид - единственных плазмид, найденных в клетках эука-риот, а также используют различные эукариотические вирусы, чаще всего ретровирусы, аденовирусы или аденоассоциированные вирусы. При использовании плазмид в качестве клонирующих векторов в них вводят вирусные последовательности, ответственные за начало реп­ликации. Введение векторов в эукариотические клетки часто осуще­ствляют путем ко-трансформации, т. е. одновременно вводят плаз-миду и сегмент чужеродной ДНК. Векторные последовательности, введенные в клетки эукариот, могут сохраняться там в течение не­скольких дней в виде суперскрученных кольцевых молекул - эпи-сом. В редких случаях возможна интеграция экзогенной ДНК в хро­мосомную ДНК. В этих случаях введенные последовательности ус­тойчиво сохраняются в геноме клеток хозяина и наследуются по менделевскому типу