вторник

Бактериальные вирусы

Для некоторых целей в качестве клонирующих векторов оказалось удобнее использовать фаги - бактериальные вирусы. Фаговая ДНК су­ществует только в линейной форме, поэтому при ее рестрикции образу­ются два фрагмента, которые сшивают с чужеродной ДНК с образова­нием химерного фага. Чисто технически эта операция проще, чем ин-серция в плазмиду. Однако размеры встраиваемой ДНК ограничены па­кующей способностью головки фага. Поэтому при конструировании вектора вырезают последовательности фаговой ДНК, не имеющие кри­тического значения для жизнеобеспечения фага. Такой бактериофаг мо­жет существовать только в том случае, если в него встроена чужеродная ДНК, по размерам сопоставимая с вырезанной фаговой ДНК. Наиболее удачные конструкции векторов были получены на основе фага X - X,gtlO, Xgtll,XZap.

Многие проблемы молекулярной генетики успешно решаются с использованием экспрессионных векторов, содержащих в своем со­ставе регуляторные последовательности, обеспечивающие синтез чу­жеродных белков в клетках хозяина. Так, в случае Xgtl 1 фаги могут быть выращены в так называемых репликативных условиях, обеспечи­вающих экспрессию инсертированной ДНК. Так как обычно ДНК встраивают в район локализации маркерного гена, позволяющего вес­ти селекцию химерных фагов, то экспрессироваться будет слитый бе­лок, в котором часть полипептидной цепи будет соответствовать мар­керному белку, а часть цепи будет транслироваться в соответствии с информацией, заключенной во встроенном фрагменте ДНК. Этот бе­лок может быть идентифицирован путем детекции фрагмента маркер­ного белка либо с помощью антител к специфическим участкам, коди­руемым чужеродной ДНК.