Места локализации предполагаемых мутаций

С помощью ПЦР можно непосредственно исследовать места локали­зации предполагаемых мутаций или полиморфных сайтов, а также изучать наличие любых других специфических особенностей ДНК. Подбор системы олигопраймеров производят на основании анализа нуклеотидной последовательности амшшфицируемого участка. Разработаны различные варианты автоматического поиска последовательностей ДНК, использование которых в качестве праймеров оптимизирует процедуру амплификации специфического участка геномной ДНК. Для того чтобы гибридизация проходила строго специфично, праймеры не должны содержать повторяющихся последовательностей ДНК. Мы уже отмечали, что для проведения ПЦР достаточно минимального количества ДНК, вплоть до одной молекулы. Кроме того, различные органические компоненты клеток, такие как белки, липиды, углеводы, фрагменты клеточных органелл или мембран, заметно не препятствуют процессу амплификации. Поэтому в качестве источника матричной ДНК может быть использован любой, даже деструктурированный биологический материал, сохранивший в своем составе достаточно полный набор фрагментов исходных молекул ДНК. Для специфической амплификации наряду с очищенной ДНК используют высушенные на фильтровальной бумаге пятна крови, небольшие кусочки тканей, например, такие как ворсины хориона, смывы из полости рта, луковицы корней волос, культуры клеток и сливы среды с клеточных культур, содержащие не прикрепившиеся и не давшие роста клетки, соскобы с цитогенетических препаратов и, что особенно удивительно, полученные при паталогоанатомическом анализе и длительно хранившиеся фиксированные ткани [Higuchi R. et al., 1988]. Более подробные сведения о постановке ПЦР можно получить в ряде специальных руководств и инструкций.